Bonjour bonjour les petits loups !
Je me présente, moi c'est
Valentine, P2 pharma avec
Bym,
Aud,
BanksSection et toute la bande de super tuteurs potards, et on s'est dit que ce serait pas mal de compléter cette chronique pour vous montrer les petits recoins de la pharma (qui sont super cool, on vous attend les pious
) !
Alors je vais vous raconter
une semaine importante de TP : la
BBCM (Biochimie et Biologie Cellulaire et Moléculaire) !
On commence le
lundi par découvrir la salle où on va jouer aux apprenti-sorciers toute la semaine, tous les jours de
14h-18h, et ça n'a rien à voir avec une salle de lycée : ici vous allez apprendre à manier des
pipettes de précision (oui, on vous demandera de prélever quelques microlitres à peine !), il y a des paillasses trop belles, un coin avec des "
hottes stérilisantes", des
microscopes, des
centrifugeuses... et un autre dans lequel on révèle des Western-Blot (#biocell) au film photographique. Et ce premier jour, on va prélever des
cellules de CHO (Ovaires de Hamster Chinois) dans le but d'analyser leurs protéines (l'actine en particulier), pour cela :
-Il va falloir les décoller, car elles sont adhérentes à leur support (on va utiliser de la trypsine-EDTA; l'EDTA étant un chélateur du calcium #cadhérines)
-On va ensuite les lyser (selon tout un protocole particulier qui inclut de la centrifugation, tube à essai dans la glace...) pour récupérer l'actine et faire le Western-Blot !
Mardi --> Ce jour-là, on est passés à une autre expérience : l'
ENZYMOLOGIE !
Le but était de déterminer différentes concentrations catalytiques d'enzyme dans 3 solutions et on a donc fait une gamme étalon avec des solutions croissantes d'enzyme, qu'on a passé au spectrophotomètre (souvenirs...) pour obtenir l'absorbance de chaque tube de notre gamme. Après ça, on en a déduit la concentration d'enzyme à partir de la loi de Beer-Lambert (re-souvenirs...), on a fait une courbe d'étalonnage et on a déterminé la Vo via la tangente à la courbe
Super TP mais un peu long et avec un compte-rendu assez fat à rendre pour le lendemain
Mercredi --> On a repris nos tubes à essais de lundi pour cette fois doser les protéines totales de notre échantillon (re gamme étalon, re mesure de l'absorbance) et on a préparé nos extraits pour le Western-Blot du lendemain ! Pour cela on a mis dans deux tubes à essais différents : 15 microgrammes de protéines dans l'un, et 30 microgrammes dans l'autre et du tampon Laemmli (tampon HCl + bêta mercapto-éthanol + SDS + bleu de bromophénol + glycérol qui va permettre d'alourdir l'échantillon et de le faire migrer dans le gel) dans les deux, on a chauffé et centrifugé et on a laissé reposer pour les reprendre le lendemain.
Jeudi --> On a donc fait enfin notre
Western-Blot Vous connaissez la méthode maintenant, il y a 3 phases : l'
électrophorèse, l'
électrotransfert et l'
immunorévélation.
Pour l'électrophorèse, on a fait tout seuls comme des grands (c'est hyper tendu en vrai, il y a une précision de fou à respecter si on veut que ça marche, donc exit les tremblements de main de magnitude 147
) ! On a disposé un marqueur de masse moléculaire, et nos deux échantillons (de
15 et 30 microgrammes de protéines) dans les puits du gel et on a laissé migrer à 200 V pendant 45 minutes. Après, on a dû transférer les protéines migrées dans le gel sur une membrane pour pouvoir les étudier. On a alors utilisé la méthode "sandwich" : dans une cassette, on a introduit des deux côtés du scotch-brite (ou éponge), des feuilles de papier buvard, une membrane de nitrocellulose et notre gel avec nos protéines et on a comprimé le tout avant de le faire tremper dans un tampon d'électrotransfert.
Après récupération de la membrane (et les protéines transférées dessus), on l'a colorée au
rouge Ponceau ce qui a eu pour effet de nous permettre de visualiser
TOUTES les protéines et non pas que l'actine.
Vendredi --> Le dernier jour
! On a repris nos membranes et on les a saturées avec du lait avant de les incuber avec de l'
anticorps anti-actine marqué avec la peroxydase (mais pourquoi la saturer ? Parce que sinon l'anticorps se fixerait partout sur la membrane et non pas spécifiquement sur l'actine) ! Après repos, on emmène la membrane dans la "chambre noire". On va étaler le réactif (du luminol) puis placer la membrane dans une cassette de révélation puis sur un film photographique : la peroxydase va oxyder le luminol qui va émettre de la lumière.
Et voilà ! On a ainsi pu
mettre en évidence notre actine sur la membrane et évidemment, si aucune manip' n'a été ratée, on peut observer qu'il y a plus d'actine sur l'échantillon à 30 microgrammes de protéines que sur celui à 15 !
Et on a terminé la journée avec une petite interro sur les TP de la semaine (parce que oui, c'est du contrôle continu et c'est cool car ce sont des points faciles pour valider la matière !
)
Voilà les poussins, j'espère que ma semaine de TP vous a permis d'en découvrir un peu plus sur
le monde magique des potards/que ça vous a confirmé que c'est ce que vous voulez faire plus tard ou même donné un petit doute genre "purée mais ça a l'air trop bien en vrai..." parce que OUI c'est trop bien
Des
bisous tout doux sur vos truffes et à bientôt pour de nouvelles aventures châtenaysiennes !
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